synvolux SP-3004-01使用方法

SAINT - PROTEIN

P R O T E I N D E L I V E R Y S Y S T E M

SAINT蛋白

為使用 SAINT-蛋白（目錄號(hào)：編號(hào)SP-3004-01、SP-3004-02、SP-3004-04）。本方案中的量適用于 24 孔板的單個(gè)孔。其他格式請(qǐng)參見(jiàn)本頁(yè)底部的表 1。P RO TE IN DE LI VE RY SY SS TE M

一般轉(zhuǎn)染方案

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

• 貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前 1 天，將細(xì)胞接種于 0.5 mL 生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到 80% 融合。轉(zhuǎn)染前，立即用不含血清的相同培養(yǎng)基（無(wú)血清培養(yǎng)基）替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
• 懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，在 0.5 mL 無(wú)血清培養(yǎng)基中以其大密度的約 80% 鋪板細(xì)胞。

2. 使 SAINT-蛋白小瓶達(dá)到室溫。

3. 充分渦旋 SAINT-蛋白約 30 秒。

4. 使用 1:10 的蛋白 (µg) 與 SAINT-蛋白 (µl) 比例制備復(fù)合物。對(duì)于每份轉(zhuǎn)染樣品，按照以下方法制備復(fù)合物：

a. 在 50µl PBS 中稀釋 2µg 蛋白。

b. 向蛋白/PBS 溶液中加入 20µl SAINT-蛋白，并輕輕重懸。

5. 在室溫下孵育混合物 5-10 min（溶液可能出現(xiàn)渾濁）。

6. 向細(xì)胞中加入復(fù)合物 (70µl)。

7. 在 CO2 培養(yǎng)箱中于 37 ℃ 下孵育 4 小時(shí)。

8. 如果需要更長(zhǎng)時(shí)間的孵育，加入 50µl 血清，將血清濃度調(diào)整至 8%。

9. 進(jìn)行檢測(cè)。

表 1. 常用多孔板的每孔推薦量

注：SAINT-蛋白試劑在 4 ℃ 下可穩(wěn)定儲(chǔ)存至少 1 年。請(qǐng)勿冷凍！