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synvolux SP-3004-01使用方法

更新時(shí)間:2020-08-06      點(diǎn)擊次數(shù):1117

 

 synvolux SP-3004-01使用方法

SAINT - PROTEIN

P R O T E I N D E L I V E R Y S Y S T E M

 

SAINT蛋白

為使用 SAINT-蛋白(目錄號(hào):編號(hào)SP-3004-01、SP-3004-02、SP-3004-04)。本方案中的量適用于 24 孔板的單個(gè)孔。其他格式請(qǐng)參見(jiàn)本頁(yè)底部的表 1。P RO TE IN DE LI VE RY SY SS TE M

 

一般轉(zhuǎn)染方案

 

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

  • 貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前 1 天,將細(xì)胞接種于 0.5 mL 生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到 80% 融合。轉(zhuǎn)染前,立即用不含血清的相同培養(yǎng)基(無(wú)血清培養(yǎng)基)替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
  • 懸浮細(xì)胞:轉(zhuǎn)染當(dāng)天,在 0.5 mL 無(wú)血清培養(yǎng)基中以其大密度的約 80% 鋪板細(xì)胞。

2. 使 SAINT-蛋白小瓶達(dá)到室溫。

3. 充分渦旋 SAINT-蛋白約 30 秒。

4. 使用 1:10 的蛋白 (µg) 與 SAINT-蛋白 (µl) 比例制備復(fù)合物。對(duì)于每份轉(zhuǎn)染樣品,按照以下方法制備復(fù)合物:

a. 在 50µl PBS 中稀釋 2µg 蛋白。

b. 向蛋白/PBS 溶液中加入 20µl SAINT-蛋白,并輕輕重懸。

5. 在室溫下孵育混合物 5-10 min(溶液可能出現(xiàn)渾濁)。

6. 向細(xì)胞中加入復(fù)合物 (70µl)。

7. 在 CO2 培養(yǎng)箱中于 37 ℃ 下孵育 4 小時(shí)。

8. 如果需要更長(zhǎng)時(shí)間的孵育,加入 50µl 血清,將血清濃度調(diào)整至 8%。

9. 進(jìn)行檢測(cè)。

 

 

表 1. 常用多孔板的每孔推薦量

 

格式

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 (µl)

蛋白 (µg)

PBS (µl)

SAINT-蛋白 (µl)

96 孔

100-200

0.4

10

4

48 孔

200-350

1

25

10

24 孔

400-750

2

50

20

12 孔

750-1500

4

100

40

6 孔

2000-3000

8

200

80

 

 

注:SAINT-蛋白試劑在 4 ℃ 下可穩(wěn)定儲(chǔ)存至少 1 年。請(qǐng)勿冷凍!

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