glenresearch  60-5000-96說(shuō)明書(shū)

Quenching buffer for Glen-Pak™ purification reagent RNA purification

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1000mL Nalgene

250mL Nalgene

Glen Pak的原則™ DNA/RNA純化

與Poly Pak一樣™ 墨盒，Glen Pak™ 盒利用保留在寡核苷酸上的5’DMT將全長(zhǎng)序列特異性結(jié)合到支持物上。在純化過(guò)程中，故障序列被消除，DMT隨后被去除，從而允許純化產(chǎn)物的洗脫。

與傳統(tǒng)固相相比，Glen-Pak凈化系統(tǒng)有許多優(yōu)點(diǎn)

萃取（SPE）系統(tǒng)。

多才多藝

直接純化寡核苷酸，無(wú)需任何預(yù)純化干燥步驟，來(lái)源：

? 氫氧化銨

? AMA（氫氧化銨/40%甲胺水溶液1:1）

? 叔丁胺/水1:3（v/v）（1）

? 甲醇中的50mM碳酸鉀（2）

? 甲醇/水中0.4M氫氧化鈉4:1（v/v）（3）

使用適用于手持式注射器、真空歧管或高通量96孔板的筒。

（1） 加載前，用100 mg/mL氯化鈉1:7（v/v）稀釋叔丁胺/水溶液。

（2） 稀釋50mM鉀

Purification of DNA Oligonucleotides (DMT-ON) 

Materials                                                                                                                                       Amount Used 

Glen-Pak DNA Purification Cartridge (60-5100-XX, 60-5200-XX)                                                      1 

Vacuum manifold (96 well or 12-24 port SPE type, if appropriate)                                                    1 

HPLC Grade Acetonitrile                                                                                                                0.5mL 

2.0M Triethylamine Acetate (60-4110-XX, TEAA, pH7)                                                                    1mL 

100 mg/mL Sodium Chloride                                                                                                            1mL 

Salt Wash Solution (5% Acetonitrile in 100mg/mL Sodium Chloride)                                              2mL 

2% Trifluoroacetic Acid (TFA)/Water (60-4040-57)                                                                            2mL 

Deionized Water 2mL50% Acetonitrile/Water containing 0.5% ammonium hydroxide*                   1mL

程序

樣品制備

1.DNA合成后，在1mL氫氧化銨或氫氧化銨/甲胺（AMA）中正常脫保護(hù)DMT-ON寡核苷酸。不需要冷凍干燥脫保護(hù)溶液。為了使該程序成功，合成必須進(jìn)行DMT-ON。堿不穩(wěn)定的保護(hù)基團(tuán)必須用AMA或氫氧化銨（1.0mL）去除。

2.向脫保護(hù)的DMT-ON寡核苷酸中加入1mL 100 mg/mL氯化鈉溶液，最終體積為2mL。樣品的最終鹽濃度必須在50 mg/mL左右，以便在試劑盒上裝載寡聚物?？赡軙?huì)加載更大的卷，但這是我們建議在盒帶上加載的卷。

墨盒準(zhǔn)備

3.將所需數(shù)量的150 mg藥筒放入輸出導(dǎo)向器下方機(jī)架中的歧管和收集管（如果需要）的陰魯爾端口中。我們通常使用12端口歧管。

4.打開(kāi)真空，使用真空控制閥將壓力調(diào)節(jié)至~7mm Hg。（如果歧管上沒(méi)有可用的控制閥，則將流速設(shè)定為每秒1-2滴左右）。使用0.5mL乙腈和1mL 2M TEAA對(duì)濾筒進(jìn)行處理。

乙腈沖洗樹(shù)脂上的有機(jī)殘留物并將其潤(rùn)濕，而TEAA作為離子配對(duì)試劑來(lái)增強(qiáng)DMT-ON寡核苷酸與樹(shù)脂的結(jié)合。

凈化程序

5.將低聚/鹽混合物以1mL等分試樣的形式涂抹在試劑盒上（收集洗脫液并保存，以防裝載失敗或錯(cuò)誤）。在裝載過(guò)程中，DMT-ON寡聚物傾向于粘附在卡盤(pán)填料上，而大多數(shù)故障序列沒(méi)有保留下來(lái)。

6.用2 x 1mL的鹽洗液清洗濾筒。這將清除盒帶中剩余的故障序列。

7.用2 x 1mL的2%TFA沖洗濾筒。拆卸DMT時(shí)，可能會(huì)看到微弱的橙色條帶